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PCR即聚合酶鏈式反應(yīng),是分子生物學研究和實驗的常規(guī)方法，也是生物學、醫(yī)學臨床等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的實驗技術(shù)。其特點是能將微量的DNA大幅增加。PCR實驗室分為四個區(qū)域，進入各工作區(qū)域必須嚴格按照單一方向進行,不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開各工作區(qū)域時，不得將工作服帶出,四區(qū)域分別為:試劑配制區(qū)、樣品處理區(qū)、核酸擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)。
PCR實驗室設(shè)計
PCR實驗室可以是分散形式，也可以是組合形式。完成一組PCR實驗，通常應(yīng)經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴增及產(chǎn)物分析四個實驗過程，若實驗工藝需要，還應(yīng)增加樣品粉碎。
①分散形式PCR實驗室：所謂分散形式PCR實驗室，是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠，呈分散布置形式。對于這種布置形式的PCRclass="wpcom_keyword_link"實驗室建設(shè)設(shè)計，由于各個實驗之間不易相互干擾，因此無需特殊條件要求。
②組合形式PCR實驗室：所謂組合形式PCR實驗室, 是指完成PCR四個實驗過程的實驗用房相鄰布置，組成獨立實驗區(qū)域的形式。對于組合形式PCR實驗室的建設(shè)設(shè)計，由于各個實驗間集中布置，容易造成相互干擾，因此，對總體布局以及屏障系統(tǒng)具有一定的要求。各室在入口處設(shè)緩沖間，以減少室內(nèi)外空氣交換。
在PCR實驗中所產(chǎn)生的DNA與RNA片段污染是一直以來PCR實驗的重點問題。此類污染主要至上次試驗中所產(chǎn)生的基因片段對下次試驗產(chǎn)生的污染，而且一旦試驗環(huán)境中的污染形成后很難處理。因為消毒等傳統(tǒng)方式對于基因污染沒有很良好的效果。所以在PCRclass="wpcom_keyword_link"實驗室設(shè)計中一般將整套實驗室設(shè)計為全新風型實驗室，這樣而已通過有效的換氣次數(shù)來達到凈化室內(nèi)污染的作用。
而在控制方面也有很多不同之處，因為各單位對PCR實驗的重視程度各有不同，所以在設(shè)計上也有不同，主要的控制設(shè)計有定送定排式壓力控制系統(tǒng)、變送定排式壓力控制系統(tǒng)變送變排式壓力控制系統(tǒng)。在控制設(shè)備方面也有很多區(qū)分如壓力無關(guān)型控制系統(tǒng)、壓力有關(guān)型控制系統(tǒng)。
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PCR實驗室又稱為基因擴增實驗室，是一種分子生物學技術(shù)，用于放大特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過DNA基因追蹤系統(tǒng)，能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量，其精確度高達納米級別，精確檢測乙肝病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量、是否復(fù)制、是否傳染、傳染性有多強、是否必要服藥、肝功能有否異常改變能及時判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗依據(jù)。
PCR實驗室設(shè)計
一、PCR實驗室基本結(jié)構(gòu)
PCR實驗室基本由四大結(jié)構(gòu)組成，常見為：試劑準備區(qū)、制備區(qū)、擴增區(qū)和擴增分析區(qū)。
二、基本功能介紹：
1、準備區(qū)：主要進行實驗所需試劑的準備工作，分裝等，由傳遞窗運送至制備區(qū)，嚴禁走人員通道。
2、制備區(qū)：主要進行樣品等保存，DNA/RNA的提取、貯存和其加入至擴增反應(yīng)管和測定DNA/RNA的合成。
3、擴增區(qū)：主要進行DNA的擴增，已制備的DNA模版和合成的cDNA的加入和主板反應(yīng)混合液制備成反應(yīng)混合液等也可在擴增區(qū)內(nèi)進行，在巢式PCR測定中，通常在首次擴增后必須打開反應(yīng)管，因此巢式擴增有較高等污染危害性，二次加樣必須在本區(qū)完成。
4、擴增分析：主要用來做擴增產(chǎn)物的測定，本區(qū)是主要的擴增產(chǎn)物污染來源，因此必須主意避免通過本區(qū)的物品或者工作服將擴增產(chǎn)物帶出。
三、PCR實驗室的走廊、傳遞窗設(shè)計常識
1. PCR走廊：并不是標配，進深不夠時不要做PCR走廊，且PCR走廊會增加交叉污染。
這4個分區(qū)(試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、核算擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū))原本就不需連接在一起。且在物理空間上必須是完全相互獨立的，各區(qū)域無論在空間上還是在使用中，應(yīng)當始終處于完全的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。
2. 傳遞窗：并非必須設(shè)置(只要不涉及潔/污分流就不需要設(shè)置傳遞窗)，但一般實驗機構(gòu)/實驗人員喜歡設(shè)置。
傳遞窗的本質(zhì)同緩沖間，是物流的緩沖間。在PCRclass="wpcom_keyword_link"實驗室設(shè)計中，試劑準備和標本制備間是重點保護的區(qū)域，此處最好不要加傳遞窗，防止交叉污染。實驗中的污染風險主要來自于核酸擴增時的加樣行為，但由于操作在生物安全柜內(nèi)進行，且確?？諝獠煌庖纾虼瞬淮嬖谖廴?。
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